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CAS9質(zhì)粒系列

CRISPR/Cas基因組編輯工具系統(tǒng)涉及到sgRNA和Cas9兩種成分。在細胞內(nèi),Cas9蛋白在單一的向?qū)NA(sgRNA)引導下識別并切割基因組上的目標靶位點,從而在基因組上人為定向制造出雙鏈斷裂(DSB)。DSB一旦形成,會激發(fā)細胞內(nèi)源性的DNA損傷修復機制以修復DSB。細胞內(nèi)的DNA修復包括非同源末端連接修復(NHEJ)、微同源介導的末端連接修復(MMEJ)和同源重組修復(HR)等三種主要形式。前兩種修復均為易錯修復,修復的結(jié)果是在DSB附近形成插入/缺失突變。如果插入/缺失突變是個移碼突變且發(fā)生在關(guān)鍵功能結(jié)構(gòu)域?qū)耐怙@子上,則可能使目標基因因移碼而不能編碼出有活性的蛋白,從而成為一種無效等位基因,結(jié)果導致基因敲除;如果同時向細胞內(nèi)提供同源供體,則這些供體會有機會被當作用于DSB修復的同源供體,結(jié)果細胞通過HR修復,成功實現(xiàn)在指定位置的基因敲入。

pYSY-T7-dCas9-Eve

  • 產(chǎn)品描述
  • dCas9-Eve原核表達質(zhì)粒,T7/dCas9-Eve;人密碼子偏好性優(yōu)化的dCas9-Eve

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