斑馬魚是一種廣泛使用于科研與藥物研發(fā)的模型系統(tǒng)，由于其與人類疾病表型的相似性而廣受歡迎。許多基于成像的實驗可用來測定斑馬魚的表型變化，但是圖像的手動采集和分析非常繁瑣且耗時。這些過程的自動化會大大提高通量及數(shù)據(jù)質(zhì)量。在這里，我們展示了Operetta CLS?和Opera Phenix?如何進行高通量的斑馬魚的成像和表型分析、篩選，使您能夠?qū)Ｗ⒂跀?shù)據(jù)評估而不是數(shù)據(jù)生成。

自動檢測高分辨率圖像-輕松鎖定斑馬魚

用普通顯微鏡對96孔板中的斑馬魚進行定位與成像非常耗時的。Harmony? 高含量分析軟件融合了PreciScan?智能圖像采集工具，集成低倍率預掃描工作流程，圖像分析，更高的放大倍率重新掃描，可完全實現(xiàn)自動化，以減少采集時間和無效的數(shù)據(jù)量，并顯著加快分析速度。斑馬魚的明場成像，通過PhenoLOGIC? 人工智能使圖像分割變得容易（圖1和圖2）。

通過機器自學習在微孔板中自動檢測斑馬魚

通過智能圖像識別提高檢測通量

通過自動水浸鏡頭獲取高分辨率共聚焦圖像

使用Harmony? 成像和分析軟件簡化與流程化圖像分析

圖1：自動定位：使用Harmony中的PhenoLOGIC功能對斑馬魚自動定位。A-5X明場預掃描。B-PhenoLOGIC經(jīng)過鼠標點擊培訓區(qū)分魚（綠點）和背景（紅點）C-以PhenoLOGIC為基礎的魚類識別，使用形狀進一步優(yōu)化，過濾去除較小的錯誤識別的地區(qū)。

圖2：PreciScan預掃描定位下一步高倍鏡掃描的區(qū)域

以20x（1.0 NA水浸鏡頭）掃描預掃描的定位區(qū)域。Z軸共聚焦50層的最大投影。700張圖像的采集時間<2分鐘。自動檢測和采集意味著無人值守。

表型的自動量化

分析基因表達模式

圖3：表達CFP，GFP，YFP和mCherry標記蛋白的斑馬魚。樣品由維也納CCRI提供。

自動準確地確定形態(tài)特征

Harmony^? 成像與分析軟件可以輕松檢測熒光強度，形態(tài)和紋理的變化。示例（圖4）顯示單個熒光染料可用于識別不同的身體部分。根據(jù)寬度識別頭部與脊柱。等效橢圓用于描述脊柱的形狀并估計其曲率。尾軸（圖5）以類似的方式，自動檢測尾部曲率。

圖4：單一熒光染料，計算確定斑馬魚頭部/尾部比例

圖5：尾軸的自動檢測。

在3D圖像中，依舊看到細節(jié)

Harmony軟件提供了3D圖像的可視化樣品的工具， Opera Phenix和Operetta CLS高內(nèi)涵分析系統(tǒng)提供從1.25x到63x的各種放大倍數(shù)，63x并配備自動水浸鏡頭，提高靈敏度，減少深層樣本成像中的光學畸變。

圖6：斑馬魚尾部血管3D重構

圖7：表達GFP和RFP的個體紅細胞