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會(huì)“發(fā)光”的斑馬魚+“基因剪刀手”!


葉酸是B族維生素的一種

孕期補(bǔ)充葉酸已成為共識(shí)

但葉酸是不是補(bǔ)充得越多越好?

上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院祖堯副教授團(tuán)隊(duì)韓旭暉等人研究發(fā)現(xiàn)過量補(bǔ)充葉酸或葉酸攝入不足可能導(dǎo)致斑馬魚胚胎心臟發(fā)育異常。

近期,題為“Precise Dose of Folic Acid Supplementation Is Essential for Embryonic Heart Development in Zebrafish”(精準(zhǔn)劑量的葉酸補(bǔ)充對(duì)斑馬魚胚胎心臟發(fā)育至關(guān)重要)的研究文章在國(guó)際綜合生物期刊biology在線發(fā)表。

這項(xiàng)研究首次闡明了葉酸對(duì)早期心臟發(fā)育的作用機(jī)制,并為葉酸的合理補(bǔ)充的劑量提供了科學(xué)依據(jù)。同時(shí),祖堯團(tuán)隊(duì)還構(gòu)建了葉酸代謝異常的斑馬魚突變體,為葉酸代謝的研究提供了一種新的生物學(xué)模型。

會(huì)“發(fā)光”的斑馬魚揭示發(fā)育異常

為了模擬人類胎兒在母體的發(fā)育環(huán)境,研究葉酸代謝如何影響胚胎心臟的發(fā)育,祖堯團(tuán)隊(duì)選用了具備生長(zhǎng)周期短、產(chǎn)卵量大、胚胎透明等優(yōu)點(diǎn)的模式生物斑馬魚開展實(shí)驗(yàn)。

而會(huì)“發(fā)光”的斑馬魚則成為了團(tuán)隊(duì)本次研究的“利器”。這是一種特殊的、帶熒光的斑馬魚(myl7:EGFP和kdrl:mCherry),利于觀察葉酸處理胚胎的發(fā)育全過程。在顯微鏡特定激發(fā)光下,這種斑馬魚心血管內(nèi)皮細(xì)胞呈現(xiàn)紅色熒光,心肌細(xì)胞呈現(xiàn)綠色熒光。論文第一作者,上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院碩士研究生韓旭暉說:“特異性標(biāo)記的熒光可以幫助我們更加清晰且直觀地看到器官發(fā)育的情況。”

研究發(fā)現(xiàn),在斑馬魚出生三天后葉酸拮抗劑組(即葉酸代謝受抑制)發(fā)生了異常的心臟環(huán)化,而葉酸過多的實(shí)驗(yàn)組斑馬魚胚胎的心房和心室拉長(zhǎng)。團(tuán)隊(duì)得出實(shí)驗(yàn)結(jié)果,即葉酸缺乏和過量都能引起斑馬魚胚胎的心臟發(fā)育異常。

“基因剪刀手”探尋葉酸代謝奧秘

“導(dǎo)致機(jī)體缺乏葉酸的原因除了葉酸攝入量不足外,還受到遺傳因素影響”,祖堯解釋,“不同的亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因型,會(huì)造成不同群體間葉酸代謝存在差異。”

其中MTHFR基因型是CC型的人體內(nèi)葉酸活化能力正常,而CT或TT型的人則存在不同程度的葉酸代謝缺陷。

還原遺傳缺陷導(dǎo)致的葉酸代謝異常,祖堯團(tuán)隊(duì)還想在斑馬魚身上“找答案”。他們利用實(shí)驗(yàn)室的“看家本領(lǐng)”——CRISPR基因編輯技術(shù)。這個(gè)“基因剪刀手”般的技術(shù),可以對(duì)基因堿基序列進(jìn)行精準(zhǔn)打靶編輯。

研究發(fā)現(xiàn),與正常的斑馬魚胚胎相比,缺少M(fèi)thfr酶的斑馬魚胚胎顯示出了異常的心臟發(fā)育,這種異常類似于葉酸代謝異常的心包腔水腫和異常的心臟環(huán)化。

研究還同時(shí)根據(jù)qPCR的結(jié)果與原位雜交實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了幾種與心臟發(fā)育密切相關(guān)的基因(hand2、gata4、nppa等)表達(dá)發(fā)生了變化。這些重要發(fā)現(xiàn)將為今后進(jìn)一步闡述葉酸代謝對(duì)心臟發(fā)育的影響提供新的思路。

從斑馬魚的實(shí)驗(yàn)中團(tuán)隊(duì)得出結(jié)論,過量補(bǔ)充葉酸或葉酸代謝不足對(duì)生物體的早期發(fā)育有負(fù)面作用,并且葉酸對(duì)生物體的發(fā)育有劑量依賴性的影響。

基于結(jié)論,祖堯團(tuán)隊(duì)建議,補(bǔ)充葉酸太少不行,太多也不好,需要做到“恰到好處”,也應(yīng)當(dāng)通過基因檢測(cè)的方式來(lái)了解自身的葉酸代謝能力。

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