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斑馬魚(yú)原位雜交


原位雜交:在研究DNA分子復(fù)制原理的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種技術(shù)。其基本原理是兩條核苷酸單鏈片段,在適宜的條件下,能過(guò)氫鍵結(jié)合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 雙鍵分子的特點(diǎn),應(yīng)用帶有標(biāo)記的(有放射性同位素,如3H、35S、32P、熒光素生物素、地高辛等非放射性物質(zhì))DNA或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細(xì)胞內(nèi)待測(cè)核酸(RNA或DNA)片段進(jìn)行雜交,然后可用放射自顯影等方法予以顯示,在光鏡或電鏡下觀(guān)察目的 mRNA或DNA 的存在并定位;用原位雜交技術(shù),可在原位研究細(xì)胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達(dá)。此方法有很高的敏感性和特異性,可進(jìn)一步從分子水平來(lái)探討細(xì)胞的功能表達(dá)及其調(diào)節(jié)機(jī)制。已成為當(dāng)今細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)研究的重要手段。

原位雜交(in situ hybridization)將標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞或組織中的核酸進(jìn)行雜交,稱(chēng)為原位雜交。

 

使用DNA或者RNA探針來(lái)檢測(cè)與其互補(bǔ)的另一條鏈在細(xì)菌或其他真核細(xì)胞中的位置。

 

RNA原位核酸雜交又稱(chēng)RNA原位雜交組織化學(xué)或RNA原位雜交。該技術(shù)是指運(yùn)用cRNA或寡核苷酸等探針檢測(cè)細(xì)胞和組織內(nèi)RNA表達(dá)的一種原位雜交技術(shù)。

 

其基本原理是:在細(xì)胞或組織結(jié)構(gòu)保持不變的條件下,用標(biāo)記的已知的RNA核苷酸片段,按核酸雜交中堿基配對(duì)原則,與待測(cè)細(xì)胞或組織中相應(yīng)的基因片段相結(jié)合(雜交),所形成的雜交體 (Hybrids)經(jīng)顯色反應(yīng)后在光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡下觀(guān)察其細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的mRNA、rRNA和tRNA分子。

 

RNA原位雜交技術(shù) 經(jīng)不斷改進(jìn),其應(yīng)用的領(lǐng)域已遠(yuǎn)超出DNA原位雜交技術(shù)。尤其在基因分析和診斷方面能作定性、定位和定量分析,已 成為最有效的分子病理學(xué)技術(shù),同時(shí)在分析低豐度和罕見(jiàn)的mRNA表達(dá)方面已展示了分子生物學(xué)的一重要方向。

 

FISH是原位雜交技術(shù)大家族中的一員,因其所用探針被熒光物質(zhì)標(biāo)記(間接或直接)而得名,該方法在80年代末 被發(fā)明,現(xiàn)已從實(shí)驗(yàn)室逐步進(jìn)入臨床診斷領(lǐng)域?;驹硎菬晒鈽?biāo)記的核酸探針在變性后與已變性的靶核酸在退火 溫度下復(fù)性。

 

 

通過(guò)熒光顯微鏡觀(guān)察熒光信號(hào)可在不改變被分析對(duì)象(即維持其原位)的前提下對(duì)靶核酸進(jìn)行分析。DNA熒光標(biāo)記探針是其中最常用的一類(lèi)核酸探針。利用此探針可對(duì)組織、細(xì)胞或染色體中的DNA進(jìn)行染色體及基因水平 的分析。熒光標(biāo)記控針不對(duì)環(huán)境構(gòu)成污染,靈敏度能得到保障,可進(jìn)行多色觀(guān)察分析,因而可同時(shí)使用多個(gè)探針,縮 短因單個(gè)探針?lè)珠_(kāi)使用導(dǎo)致的周期過(guò)程和技術(shù)障礙。

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